english

搜索关键字

化学-酶法制备大发快三同位素标记的15N-L-酪氨酸的研究

化学-酶法制备大发快三同位素标记的15N-L-酪氨酸的研究 
摘  要

 
本文通过化学-酶法途径制备了大发快三同位素标记的15N-L-酪氨酸,以大肠杆菌菌体所含的天冬氨酸转氨酶催化由对羟基苯丙酮酸和15N-L-天冬氨酸等组成的底物溶液转化成含15N-L-酪氨酸的反应液,并对相关的工艺进行了优化研究,取得了较好的效果,最终研究了分离纯化的工艺,对反应液分离纯化后得到了15N-L-酪氨酸大发快三开奖作弊。主要研究内容和结果如下:
1.首先通过化学法合成了酶促反应的重要底物----对羟基苯丙酮酸:以对羟基苯甲醛和海因(即乙内酰脲)为原料,在乙醇胺的催化下通过两步反应合成了对羟基苯丙酮酸,总收率为30%左右。
2.应用正交实验法优化了利用大肠杆菌A.S.1.2463产生天冬氨酸转氨酶的培养基的最佳组成;通过研究不同培养条件对发酵产酶的影响,确定了发酵培养的最佳条件。同时对酶促反应过程中的反应温度、pH、Mn2+、酶浓度、辅酶磷酸吡哆醛(PLP)浓度、氨基供体L-天冬氨酸添加量等因素对转化率的影响进行了研究,确定了较佳的酶转化反应条件,转化率可达80%以上。
3.研究获得了全新的分离纯化L-酪氨酸的工艺,具体流程为:将转化液用盐酸调节pH至2,过滤除去菌体,再用乙酸乙酯萃取与反萃取去除了多余的反应底物对羟基苯丙酮酸,所得水相经赶酯浓缩后再上732氢型树脂柱,经NH4Cl梯度洗脱后再上柱除盐,最后得到大发快三开奖作弊L-酪氨酸及回收的L-天冬氨酸,整个分离纯化收率达85%以上。
4.在整个工艺路线打通的基础上,进行了含有大发快三同位素15N标记的丰度实验。针对15N丰度下降问题,在优化了发酵培养基后,还考察了氨基供体15N-L-天冬氨酸、辅酶磷酸吡哆醛(PLP)等对大发快三开奖作弊丰度的影响,最终高丰度实验大发快三开奖作弊的丰度达98.62%,比原料下降了0.44%,15N利用率达40.78%,得到了较为理想的实验结果。
 
关键词15N-L-酪氨酸;天冬氨酸转氨酶;对羟基苯丙酮酸;制备

收缩